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HPLC色谱柱的保养
正常情况下，色谱柱至少可以使用3-6个月，能完成数百次以上的分离。但若操作不慎，色谱柱很易损坏而不能使用。因此为了保护柱效、柱容量及渗透性，必须对色谱柱进行仔细的保养。
色谱柱的在线保护方法有：除去样品及流动相中颗粒（过0.45微米甚至0.22微米滤膜）；防止化学污染；装可更换滤芯的在线过滤器；安装保护柱。
(2)最好使用保护柱。保护柱是加在进样阀和分析柱之间，长度一般为1-5厘米，填充与分析柱性质相似或者相同的填料。
(2)色谱柱的清洗。每次做完分析，都要进行冲洗，每种色谱柱可能有特定的清洗方法，要先看使用说明。
① 用适当的溶剂冲洗色谱柱。在清洗色谱柱时，最好用与流动相组成相同的溶剂。分析用流动相中若无酸、碱、盐类物质，建议用90%的甲醇冲洗30~60min。若分析用流动相中含以上物质，要先用10%甲醇（或用与分析用流动相同比例，把含酸、碱、盐溶液换成水）冲洗1h左右，再梯度走到90%甲醇冲洗30~60min（若用多元泵）。有必要时再循环几次，可以适当缩短时间。
② 对所做的样品要有充分的了解，用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗。如果用比分析流动相更强的溶剂冲洗，该溶剂与流动相组成相同但不含盐和酸。
③ 如果认为步骤②没能完全清洗干净色谱柱，可用100％最强溶剂冲洗。如果使用其他的溶剂，最重要的是要考虑到溶剂之间的互溶性，不要用强酸和强碱。
(3)对硅胶基键合相填科，水溶液流动相的pH值不得超出2-8.5的范围，使用温度不宜过高。柱子在酸性或碱性条件下使用之后，应依次用水、甲醇清洗，对暂时不用而需要较长时间保存的柱子，存放前要冲洗除去杂质和缓冲盐。然后用纯甲醇清洗，柱子两端用金属螺帽封闭，保存于干净的有机溶剂中（最好用甲醇），避免色谱柱床的干涸，避免机械振动，防止细菌生长，注意存放的温度。
(4)若流动相中用到离子对试剂，更应该好好冲洗，且该色谱柱最好作为专用。
(5)要防止流动相逆向流动（避免反冲），否则将使固定相层位移，柱效下降。
(6)普通C18柱尽量避免在40℃以上的温度分析。
(7)定期测柱效，如有下降，可以用10%异丙醇甲醇冲洗色谱柱。若柱效还没有改善，可以用甲醇→二氯甲烷→甲醇再生。再生方法如下：
将色谱柱从系统上取下，反向连接到输液泵上。色谱柱出口不要连接到检测器上，以免污染检测池。多数的硅胶基质柱反相冲洗没有问题，但是聚合物基质柱不能如此操作，在反相冲洗柱之前最好与柱生产商确认，反向冲洗流动相流速不要太大。硅胶柱一般先用甲醇洗去极性杂质，用干燥的二氯甲烷、正庚烷100~200mL依次活化。键合相柱（烷基柱）一般可用20倍柱体积的甲醇→氯仿→甲醇→水依次冲洗。
(8)必须将流动相仔细地蒸馏或用0.45微米孔径的滤膜过滤。在流动相组贮槽与色谱柱间，安装0. 45 um孔径的过滤器。
(9)最好使用进样阀进样，以防止注射器进样时，注射隔膜碎屑堵塞柱子入口。
(10)要防止色谱柱被振动或撞击，以免柱内填料床层产生裂缝和空隙。
